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LSM 淋巴細(xì)胞分離液

用途：

       分離混合血液白細(xì)胞早期的方法，總是伴隨紅細(xì)胞聚集，只輕微影響白細(xì)胞。通過離心，紅細(xì)胞密度增加聚集，同時(shí)可以從離心管上部收集白細(xì)胞。

       Böyum提出了一種更方便，通過使用Ficoll^® 甲泛影鈉溶液離心快速分離方法。稀釋的血液在Ficoll?甲泛影鈉溶液中分層，低速短時(shí)離心。紅細(xì)胞和沉降到管底的粒細(xì)胞，和單個(gè)核細(xì)胞（淋巴細(xì)胞）和血小板可以從兩個(gè)分層之間收集。

       許多研究者不斷努力，修訂了Böyum方法，MP生物醫(yī)學(xué)公司生產(chǎn)的LSM，方法的獨(dú)特之處是運(yùn)用,泛影鈉成功的代替了甲泛影鈉。

程序原理：

       除去血液中的纖維蛋白或肝素處理血液以1：1的比例用生理鹽水或平衡鹽溶液稀釋，在分離溶液中分層，低速離心30分鐘。通過離心，遷移能力不同最終形成不同的細(xì)胞層。

       大部分的紅細(xì)胞和粒細(xì)胞通過梯度遷移形成顆粒狀。由于其密度不同，淋巴細(xì)胞和其他單個(gè)核細(xì)胞（單核細(xì)胞和血小板）分布在在血漿和LSM兩層中間。淋巴細(xì)胞可以通過回抽分層回收，在進(jìn)一步去除血小板，LSM和血漿。

試劑：

       LSM^® is a sterile filtered solution which contains 6.2g Ficoll and 9.4 g sodium diatrizoate per 100 ml. The density is 1.0770-1.0800 g/ml at 200C.

       LSM^® 是一種滅菌過濾溶液，每100毫升包含6.2克聚蔗糖和9.4克鈉胺。密度是1.0770-1.0800克/毫升20℃。

使用說明：

       以下的操作步驟是最初由Böyum.設(shè)計(jì)的程序的眾多改良版本中的一種。此程序的改良是通過運(yùn)用除去血液中的纖維蛋白或抗凝血?jiǎng)┨幚砣梭w血液；這種改良對于其他物種來源血液或者其他組織非常有必要。

1. 輕輕顛倒瓶子使LSM充分混合

2. 無菌轉(zhuǎn)移3 mlLSM到15 ml離心管中。

3. 混合2 ml除纖維蛋白血液或肝素處理血液 和2 ml 生理鹽水

4. 仔細(xì)的將稀釋血液加入3 mlLSM（室溫）于15ml離心管中，在血液和LSM中形成一個(gè)明顯的分層。不要將稀釋血液混合入LSM中。

5. 室溫下400g離心15-30分鐘，離心可以沉淀紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞同時(shí)可以再LSM上形成一層單核淋巴細(xì)胞，如上圖所示。

6. 吸出淋巴細(xì)胞上方2-3mm的血漿。

7. 吸取淋巴細(xì)胞層以及它下面一半的LSM和轉(zhuǎn)移到另外的一個(gè)離心管。加入等體積的平衡鹽緩沖液至淋巴細(xì)胞離心管中，室溫離心10分鐘，離心速度設(shè)定在既不損傷細(xì)胞又能沉淀細(xì)胞即刻，例如160 - 260 x g（去除LSM和降低血小板的百分比）。

8. 用平衡鹽緩沖液清洗細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基重懸細(xì)胞。


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