泉州市人民醫(yī)院(362000) 陳麗蕓 福建醫(yī)藥雜志 2002年第24卷第3期
中國藥典2000年版沿用鱟試劑法用于0.9%氯化鈉注射液等藥物的細(xì)菌內(nèi)毒素限量檢查。藥典規(guī)定0.9%氯化鈉注射液中細(xì)菌內(nèi)毒素量不得超過0.5Eu*ml－1。在實際工作中我們通常使用標(biāo)示靈敏度均為0.5Eu*ml－1的廈門、福州兩地的鱟試劑廠產(chǎn)品。在使用中我們通過鱟試劑靈敏度測定實驗發(fā)現(xiàn)由于生產(chǎn)廠家不同，部份鱟試劑的實測靈敏度與標(biāo)示靈敏度有差異而導(dǎo)致檢測同一檢品時，用標(biāo)示靈敏度相同的鱟試劑出現(xiàn)不同結(jié)果，因而可能引起結(jié)果判斷差異。
1 實驗材料
廈門鱟試劑靈敏度標(biāo)示量0.5Eu*ml－1，0.1ml*支－1，批號20010605。福州鱟試劑靈敏度標(biāo)示量0.5Eu*ml－1，0.1ml*支－1，批號為20011110。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品10Eu*ml－1，批號20011106，超純水批號為20010906。實驗前所用器皿需經(jīng)處理，去除可能存在外源性內(nèi)毒素。常用的方法是250℃干烤至1小時，也可用其它適宜方法，并應(yīng)確證不干擾細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查。
2 實驗及結(jié)果
按中國藥典2000年版規(guī)定進行鱟試劑靈敏度復(fù)核，結(jié)果：內(nèi)毒素濃度(Eu*ml－1)：1，0.5，0.25，0.125；內(nèi)毒素加量(ml)：0.1，0.1，0.1，0.1；鱟試劑加量(ml）：0.1，0.1，0.1，0.1；福州鱟試劑反應(yīng)管組1：+，+，－，－；組2：＋，＋，－，－；組3：＋，＋，－，－；組4：＋，＋，－，－；廈門鱟試劑反應(yīng)管編組1：＋，＋，－，－；組2：＋，－，－，－；組3：＋，－，－，－；組4：＋，－，－，－。其陰性對照組實驗結(jié)果為陰性。福州鱟試劑靈敏度測定值為λc＝1－1g(Σx)/(4)＝0.5Eu*ml－1；廈門鱟試劑靈敏度測定值為λc＝lg(zx)/(4)＝0.71Eu*ml－1；中國藥典規(guī)定鱟試劑靈敏度λc在0.5λb－2λb之間即符合規(guī)定也是說復(fù)核結(jié)果應(yīng)在標(biāo)示值的50%～200％之間。以上兩種不同廠家的鱟試劑均符合規(guī)定要求。
用上述兩種鱟試劑按藥典法對本院制劑0.9%氯化鈉注射液(批號為20020225)行細(xì)菌內(nèi)毒素限量檢查結(jié)果：廈門鱟試劑，檢品批號20020225，結(jié)果“－”；福州鱟試劑，檢品批號20020225，結(jié)果“＋”。平行重復(fù)以上實驗，結(jié)果均一致。福州鱟試劑為20020225批號的0.9%氯化鈉細(xì)菌內(nèi)毒素限量檢查判定為不符合藥典規(guī)定，而廈門鱟試劑對同一產(chǎn)品判定為符合規(guī)定，結(jié)果相互矛盾。
3 討論
以上實驗提示由于不同廠家鱟試劑標(biāo)示靈敏度相同而實際靈敏度不同導(dǎo)致同一樣品產(chǎn)生完全不同的檢測結(jié)果。中國藥典2000年版規(guī)定0.9%氯鈉注射液細(xì)菌內(nèi)毒素含量不得超過0.5Eu*ml－1，即小于或等于0.5Eu*ml－1，因此我們通常采用標(biāo)示靈敏度為0.5Eu*ml－1的鱟試劑進行檢測。但是，當(dāng)實際靈敏度與標(biāo)示靈敏度產(chǎn)生誤差時有可能導(dǎo)致檢測結(jié)果的假陽性或假陰性。在本實驗中批號20010605廈門鱟試劑的實測靈敏度為0.71Eu*ml－1，也就是說對于濃度小于0.71Eu*ml－1的細(xì)菌內(nèi)毒素不敏感。對于含細(xì)菌內(nèi)毒素為0.5Eu*ml－1～0.71Eu*ml－1的樣品實測結(jié)果仍顯示陰性，這就是我們通常所說的假陰性，這是實測靈敏度小于標(biāo)示靈敏度λc＞λb的情況，當(dāng)實測靈敏度大于標(biāo)示靈敏度即λc＜λb時，結(jié)果就易出現(xiàn)假陽性，如950708批號福州鱟試劑λc＝0.25Eu*ml－1對0.9%氯化鈉注射液出現(xiàn)假陽性。實驗結(jié)果表明，在可能的情況下，我們應(yīng)選用標(biāo)示靈敏度與實際靈敏度相符的鱟試劑進行檢測，避免出現(xiàn)因鱟試劑本身造成的判斷失誤，對于λc＜λb或λc＞λb的情況應(yīng)該對供試品進行稀釋或濃縮后進行檢測。稀釋(濃縮)倍數(shù)n＝(x)/(n)式中λ即該鱟試劑實際靈敏度(Eu*ml)－1，x即供試品的內(nèi)毒素限度(Eu*ml)－1。
靈敏度一定的某批鱟試劑與不同濃度的內(nèi)毒素形成凝膠反應(yīng)的時間與濃度間存在下列關(guān)系logC＝blogT＋loga［1］式中C即內(nèi)毒素濃度(Eu*ml)－1，T即生成凝膠的時間(分鐘)，a、b即常數(shù)。不同靈敏度的鱟試劑a、b值不同，可按下列方法測定：取不同濃度的內(nèi)毒素，分別測定與某批鱟試劑生成陽性反應(yīng)的時間，每一濃度不少于兩管，分別取對數(shù)后，求lgC與lgT所成回歸線的斜率b及截距l(xiāng)ga。利用該批鱟試劑測定樣品時，根據(jù)生成凝膠反應(yīng)所用的時間即可求出樣品的內(nèi)毒素含量，對λc與λb不相符的鱟試劑亦可用此法進行限量檢測，結(jié)果更精確。為了方便使用，建議法定部門和生產(chǎn)單位應(yīng)注意鱟試劑的質(zhì)量檢查。
參 考 文 獻
1.馬劍文，韓永平，沈克溫．現(xiàn)代藥品檢驗學(xué)．第1版．北京：人民軍醫(yī)出版社，1994，834．
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