1. 直接適應(yīng)——細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中。 一些類型細胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。對于直接適應(yīng)，接種細胞密度應(yīng)該:2.5×105~3.5×105細胞/ml。當(dāng)細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml時，傳代培養(yǎng)細胞。當(dāng)細胞密度在培養(yǎng)4到7天后達到2×106~4×106細胞/ml時，細胞完全適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基。每隔3~5天，當(dāng)細胞密度達到1×106~3×106細胞/ml，細胞活率在90％時，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。 2. 連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中，與直接適應(yīng)相比較，連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩毎訙睾鸵恍?br /> （1） 以2倍正常接種密度接種生長活躍的細胞培養(yǎng)物到75％有血清培養(yǎng)基：25％SFM 混合培養(yǎng)基中，傳代培養(yǎng)。 （2） 當(dāng)細胞密度>5×105細胞/ml時，以2×105到3×105細胞/ml細胞密度，在有血清培養(yǎng)基：SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。 （3） 以2×106到3×106細胞/ml細胞密度，25％有血清培養(yǎng)基和75％ SFM中傳代培養(yǎng)。 （4） 當(dāng)細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml（接種后4到6天），在100％SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。 （5） 每隔3到5天，當(dāng)細胞密度達到1×106到3×106細胞/ml，細胞活率在90％時，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。 建議備份前一次混合培養(yǎng)的培養(yǎng)物，直到每一次細胞適應(yīng)了新的混合培養(yǎng)基。每一次減少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培養(yǎng)基中進行幾次傳代。 在適應(yīng)過程中，最好不要讓細胞生長過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意，與有血清培養(yǎng)基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白質(zhì)，因而更易于受外界因素的影響。 細胞培養(yǎng)適應(yīng)替代血清：許多細胞利用連續(xù)適應(yīng)方法能很好的適應(yīng)，用包含F(xiàn)BS的的培養(yǎng)基和包含有替代血清的培養(yǎng)基1∶1（v∶v）的混合培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞。通過下列的混合培養(yǎng)基的方式，連續(xù)幾代減少當(dāng)前培養(yǎng)基的量：1∶2，1∶4，1∶16和100％替代培養(yǎng)基。每次適應(yīng)改變血清比例時，傳代細胞2到3 次。 培養(yǎng)可以直接從FBS轉(zhuǎn)換到替代血清。一開始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清，生長的延遲可能會發(fā)生，4允許進行2到3次的傳代，使生長率恢復(fù)到以前的水平。 特別需要強調(diào)的是：配制無血清培養(yǎng)液必須使用高質(zhì)量的水，如石英玻璃蒸餾器經(jīng)三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因為無血清培養(yǎng)基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護細胞的大分子，既便水中的有毒物質(zhì)含量甚微，也可能對細胞產(chǎn)生致死性損害。這是無血清培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵因素之一。 無血清培養(yǎng)基的優(yōu)點 1. 可避免血清批次間的質(zhì)量變動，提高細胞培養(yǎng)和實驗結(jié)果的重復(fù)性。 2. 避免血清對細胞的毒性作用和血清源性污染。 3. 避免血清組分對實驗研究的影響。 4. 有利于體外培養(yǎng)細胞的分化。 5. 可提高產(chǎn)品的表達水平并使細胞產(chǎn)品易于純化。 缺點： 1. 細胞在無血清培養(yǎng)基中易受某些機械因素和化學(xué)因素的影響，培養(yǎng)基的保存和應(yīng)用不如傳統(tǒng)的合成培養(yǎng)基方便。 2. 成本較高。 3. 針對性很強，一種無血清培養(yǎng)基僅適合某一類細胞的培養(yǎng)。 無血清培養(yǎng)基一些配方 1. 神經(jīng)細胞，干細胞，PC12細胞 成份 終濃度 葡萄糖－－0.6％ 谷氨酰胺－2mM NaHCO3－－3mM Hepes －－5mM 胰島素－－2.5μg/ml 轉(zhuǎn)鐵蛋白 －100ng/ml 孕 酮 －－20nM 丁二胺－－60μM 硒酸鈉－－30nM 青霉素－－50mg/ml 鏈霉素－－50mg/ml 最后用DF12添加到100ml即可 2. 各類小鼠胚胎癌細胞系培養(yǎng)基 DMEM/F12 1:1混合成1000ml NaHCO3 2.4g HEPES「1.5M」 10.0ul 硒酸（5*10-6M」 10.0ug 纖粘連蛋白 1ug/cm2「37度作用15－30分鐘） 胰島素 1000.0ug 轉(zhuǎn)鐵蛋白 5000.0ug 3. NIH3T3小鼠成纖維細胞培養(yǎng)基 DMEM/F12 1:1混合成1000ml HEPES 15mM 大豆胰酶抑制劑 0.1％ 胰島素 10.0ug/ml 轉(zhuǎn)鐵蛋白 25.0ug/ml 纖粘連蛋白 5.0ug/ml 4. 雜交瘤細胞培養(yǎng)基 DMEM/F12 1:1混合成1000ml NaHCO3 1.2g/L HEPES 15mM 胰島素 5.0ug/ml 氨基乙醇 20.0uM 硒酸 2.5mM 轉(zhuǎn)鐵蛋白 35.5ug/ml
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