LONZA X-VIVO無血清培養(yǎng)基 網(wǎng)址鏈接 http://www.kjhfd.cn/a/gb2312/news/20121109/4913.html
lonza 特殊 無血清 培養(yǎng)基 網(wǎng)址鏈接
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培養(yǎng)基（Medium）是供微生物、植物和動物組織生長和維持用的人工配制的養(yǎng)料，一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無機(jī)鹽（包括微量元素）以及維生素和水等。有的培養(yǎng)基還含有抗菌素和色素。
無血清培養(yǎng)基(serum free medium,SFM):是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長時間生長繁殖的合成培養(yǎng)基。但是它們可能包含個別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎(chǔ)培養(yǎng)基加少量血清所配制的完全培養(yǎng)基可以滿足大部分細(xì)胞培養(yǎng)的要求，但對有些實(shí)驗(yàn)卻不適合，如觀察一種生長因子對某種細(xì)胞的作用，這時需要排除其他生長因子的干擾作用。而血清中可能含有各種生長因子；又如需要測定某種細(xì)胞在培養(yǎng)過程中分泌某種物質(zhì)（抗體、生長因子）的能力；或者要大規(guī)模的培養(yǎng)某種細(xì)胞，以獲得它們的分泌產(chǎn)物。因此研制出無血清培養(yǎng)基一直是生物科學(xué)工作者努力的目標(biāo)。上海恒利安生物科技有限公司已成功開發(fā)了商業(yè)化的多種無血清培養(yǎng)基，可滿足眾多廠商的需求。
無血清培養(yǎng)基和試劑被廣泛的應(yīng)用于培養(yǎng)哺乳動物和無脊動物細(xì)胞以制備單克隆抗體，病毒抗原和重組蛋白等。大多數(shù)的無血清產(chǎn)品含有向細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)離子的轉(zhuǎn)鐵蛋白和調(diào)節(jié)葡萄糖攝取量的胰島素，以及一些蛋白質(zhì)如清蛋白，纖連蛋白，胎球蛋白等，這些蛋白在細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)揮各種不同功能，如吸附毒性化合物，抗生物反應(yīng)器剪切力，提供細(xì)胞貼壁所需的基質(zhì)，作為脂類和其他生長因子的載體等。
一、無血清培養(yǎng)基的基本配方:基本成分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基及添加組分兩大部分。
用于生物制藥和疫苗生產(chǎn)的細(xì)胞在體外培養(yǎng)時，多數(shù)呈貼壁生長或兼性貼壁生長；而當(dāng)其在無血清、無蛋白培養(yǎng)基中生長時，由于缺乏血清中的各種粘附貼壁因子如纖粘連蛋白、層粘連蛋白、膠原、玻表粘連蛋白，細(xì)胞往往以懸浮形式生長。
添加組分包括以下幾大類物質(zhì)：
(1）促貼壁物質(zhì)：許多細(xì)胞必須貼壁才能生長，這種情況下無血清培養(yǎng)基中一定要添加促貼壁和擴(kuò)展因子，一般為細(xì)胞外基質(zhì)，如纖連蛋白、層粘連蛋白等。它們還是重要的分裂素以及維持正常細(xì)胞功能的分化因子，對許多細(xì)胞的繁殖和分化，起著重要作用。纖連蛋白主要促進(jìn)來自中胚層細(xì)胞的貼壁與分化，這些細(xì)胞包括成纖維細(xì)胞、肉瘤細(xì)胞、粒細(xì)胞、腎上皮細(xì)胞、腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞、CHO細(xì)胞、成肌細(xì)胞等。
(2）促生長因子及激素：針對不同細(xì)胞添加不同的生長因子。激素也是刺激細(xì)胞生長、維持細(xì)胞功能的重要物質(zhì)，有些激素是許多細(xì)胞必不可少的，如胰島素。
(3）酶抑制劑：培養(yǎng)貼壁生長的細(xì)胞，需要用胰酶消化傳代，在無血清培養(yǎng)基中必不可少須含酶抑制劑，以終止酶的消化作用，達(dá)到保護(hù)細(xì)胞的目的。最常用的是大豆胰酶；抑制劑。
(4）結(jié)合蛋白和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白：常見如轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛血清白蛋白。牛血清白蛋白的添加比較大，可增加培養(yǎng)基的粘度，保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷。許多旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)的無血清培養(yǎng)基都含有牛血清白蛋白。
(5)微量元素：硒是最常見的。 二、使用方法:目前，血清仍是動物細(xì)胞培養(yǎng)中最基本的的添加物，尤其是在原代培養(yǎng)或者細(xì)胞生長狀況不良時，常常會先使用有血清的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，待細(xì)胞生長旺盛以后，再換成無血清培養(yǎng)液。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)要有一個適應(yīng)過程，一般要逐步降低血清濃度，從10%減少到5%，3%，1%，直至無血清培養(yǎng)。在降低過程中要注意觀察細(xì)胞形態(tài)是否發(fā)生變化，是否有部分細(xì)胞死亡，存活細(xì)胞是否還保持原有的功能和生物學(xué)特性等。在實(shí)驗(yàn)后這些細(xì)胞一般不再繼續(xù)保留，很少有細(xì)胞能夠長期培養(yǎng)于無血清培養(yǎng)基而不發(fā)生改變的。細(xì)胞轉(zhuǎn)入無血清培養(yǎng)之前，要留有種子細(xì)胞，種子細(xì)胞按常規(guī)培養(yǎng)于含血清的培養(yǎng)基中，以保證細(xì)胞的特性不發(fā)生變化。
為了使細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)，關(guān)鍵的是使所培養(yǎng)細(xì)胞：
●處于對數(shù)生長中期
●>90% 活細(xì)胞率
●適應(yīng)時以較高的起始細(xì)胞接種
有兩種方法使細(xì)胞適應(yīng)無血清培養(yǎng)基（SFM）:
1. 直接適應(yīng)——細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中。
一些類型細(xì)胞可直接從包含血清的培養(yǎng)基適應(yīng)無血清培養(yǎng)基。對于直接適應(yīng)，接種細(xì)胞密度應(yīng)該:2.5×105~3.5×105細(xì)胞/ml。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106~3×106細(xì)胞/ml時，傳代培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)細(xì)胞密度在培養(yǎng)4到7天后達(dá)到2×106~4×106細(xì)胞/ml時，細(xì)胞完全適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基。每隔3~5天，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106~3×106細(xì)胞/ml，細(xì)胞活率在90％時，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
2. 連續(xù)適應(yīng)——分好幾步把細(xì)胞從添加血清的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)換到無血清培養(yǎng)基（SFM）中，與直接適應(yīng)相比較，連續(xù)適應(yīng)趨向?qū)τ诩?xì)胞更加溫和一些。
●以2倍正常接種密度接種生長活躍的細(xì)胞培養(yǎng)物到75%有血清培養(yǎng)基：25％SFM 混合培養(yǎng)基中，傳代培養(yǎng)。
●當(dāng)細(xì)胞密度>5×105細(xì)胞/ml時，以2×105到3×105細(xì)胞/ml細(xì)胞密度，在有血清培養(yǎng)基：SFM為50∶50的混合培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
●以2×106到3×106細(xì)胞/ml細(xì)胞密度，25％有血清培養(yǎng)基和75% SFM中傳代培養(yǎng)。
●當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml（接種后4到6天），在100％SFM培養(yǎng)基中傳代培養(yǎng)。
●每隔3到5天，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1×106到3×106細(xì)胞/ml，細(xì)胞活率在90％時，貯備的適應(yīng)了無血清培養(yǎng)基的細(xì)胞培養(yǎng)物應(yīng)該再次傳代培養(yǎng)。
建議備份前一次混合培養(yǎng)的培養(yǎng)物，直到每一次細(xì)胞適應(yīng)了新的混合培養(yǎng)基。每一次減少血清前，可能需要在SFM/有血清混合培養(yǎng)基中進(jìn)行幾次傳代。
在適應(yīng)過程中，最好不要讓細(xì)胞生長過度。這將增加選擇亞群的可能性。需要注意，與有血清培養(yǎng)基相比，大部分SFM包含非常少的蛋白質(zhì)，因而更易于受外界因素的影響。
細(xì)胞培養(yǎng)適應(yīng)替代血清：許多細(xì)胞利用連續(xù)適應(yīng)方法能很好的適應(yīng)，用包含F(xiàn)BS的的培養(yǎng)基和包含有替代血清的培養(yǎng)基1∶1（v∶v）的混合培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞。通過下列的混合培養(yǎng)基的方式，連續(xù)幾代減少當(dāng)前培養(yǎng)基的量：1∶2，1∶4，1∶16和100％替代培養(yǎng)基。每次適應(yīng)改變血清比例時，傳代細(xì)胞2到3次。
培養(yǎng)可以直接從FBS轉(zhuǎn)換到替代血清。一開始就使用相同于FBS的濃度的替代物或血清，生長的延遲可能會發(fā)生，4允許進(jìn)行2到3次的傳代，使生長率恢復(fù)到以前的水平。
特別需要強(qiáng)調(diào)的是：配制無血清培養(yǎng)液必須使用高質(zhì)量的水，如石英玻璃蒸餾器經(jīng)三次蒸餾或超純水凈化裝置制備的水。因?yàn)闊o血清培養(yǎng)基缺乏了血清中天然成分中和毒素、保護(hù)細(xì)胞的大分子，既便水中的有毒物質(zhì)含量甚微，也可能對細(xì)胞產(chǎn)生致死性損害。這是無血清培養(yǎng)能否成功的關(guān)鍵因素之一。
三、使用無血清培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)
●增加確定性
●性能更加一致
●容易進(jìn)行純化和下游加工
●細(xì)胞功能的精確評估
●增強(qiáng)生長和/或產(chǎn)量
●生理反應(yīng)性的較好對照
●增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)中介物的檢測
無血清培養(yǎng)基種類：
①UltraCULTURETM培養(yǎng)劑
UltraCULTURE MEDIUM(Serum-free general purpose medium)
簡介：一種通用的無血清培養(yǎng)劑
適用范圍：培養(yǎng)貼壁和懸浮哺乳動物細(xì)胞，疫苗生產(chǎn)中病毒顆粒的制備
②PC-1TM培養(yǎng)基
PC-1Complete Serum-free Medium 5
PC-1 Complete Serum-free Medium(powder plus supplement)
PC-1 Supplement (50)
簡介：是一種低蛋白，無血清培養(yǎng)基。PC-1培養(yǎng)基旨在應(yīng)用于各種研究和工業(yè)用途，使用限定成份配制的培養(yǎng)基確保在維持最低蛋白成分同時使細(xì)胞獲得最佳的生長狀態(tài)。
適用范圍：培養(yǎng)原代細(xì)胞和貼壁依賴性細(xì)胞
③UltraMEM Reduced Serum培養(yǎng)基
UltraMEM Reduced Serum Medium
(Low-protein medium containing L-glutamine &ITES)
UltraMEM Reduced Serum Medium
(Protein-free basal medium without L-glutamine)
簡介：用于支持多種貼壁信賴性細(xì)胞在低血清濃度下的正常生長的限定培養(yǎng)基。
適用范圍：培養(yǎng)貼壁信賴性細(xì)胞
④UltraCHOTM培養(yǎng)基
UltraCHO Meidum(1*liquid with L-glutamine) 1L
UltraCHO Meidum(1*liquid without nucleosides) 500mL
UltraCHO Supplement(Non-sterile) 100ml
簡介：培養(yǎng)基最適于培養(yǎng)轉(zhuǎn)染和未轉(zhuǎn)染的中國倉鼠卵巢細(xì)胞（CHO）細(xì)胞，表達(dá)重姐蛋白質(zhì)。
適用范圍：培養(yǎng)CHO細(xì)胞; 重組蛋白的合成。
⑤UltraMDCKTM培養(yǎng)基
UltraMDCK Meida
簡介：是一種無血清限定培養(yǎng)劑，適于高/低平板密度培養(yǎng)MADIN-DABBY犬腎細(xì)胞（MDCK）
適用范圍：培養(yǎng)供體外診斷（IVD）用的MDCK細(xì)胞
⑥Pro293TMCDM系統(tǒng)
PRO 293A-CDM
1PRO 293S-CDM
簡介：用于293細(xì)胞（轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞）培養(yǎng)Pro293限定培養(yǎng)基系統(tǒng)是專為促進(jìn)293細(xì)胞重組蛋白的合成和下游反應(yīng)而開發(fā)的。這些配方不需要任何動物來源的成分即可支持高密度的培養(yǎng)
適用范圍：293細(xì)胞重組蛋白和合成
⑦Insect-XPRESSTM培養(yǎng)基
Insect-XPRESS Medium
簡介：采用一種無蛋白配方，適合培養(yǎng)來源于Spodoptera frugiperda(Sf9和Sf21)的昆蟲細(xì)胞系。
適用范圍：桿狀病毒的增殖，重組蛋白的表達(dá)。
⑧HL-1TM完全無血清培養(yǎng)基
HL-1 Complete Serum-free Medium(powder) 10L
簡介：HL-1TM完全無血清培養(yǎng)基是一種限定培養(yǎng)基，蛋白含量低于30ug/ml. HL-1TM完全無血清培養(yǎng)基不含牛血清白蛋白和其它不明蛋白混合物。
適用范圍：雜交瘤細(xì)胞和淋巴細(xì)胞來源的分化細(xì)胞的無血清培養(yǎng)。
⑨UltraDOMATM培養(yǎng)基
BUltraDOMA Medium 500ml
簡介：適用于中空纖維反應(yīng)器中進(jìn)行中，鼠和嵌合雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)及上述細(xì)胞的批量培養(yǎng)。
適用范圍：雜交瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，單克隆抗體的制備。
⑩UltraDOMA-PFTM無蛋白培養(yǎng)基
UltraDOMA-P.F.Protein-free Medium
簡介：一種不含蛋白的培養(yǎng)基，適于鼠，人和嵌合細(xì)胞來源的雜交瘤細(xì)胞系的培養(yǎng)。
適用范圍：雜交瘤細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞的培養(yǎng)，單克隆抗體的制備。
11. X-VIVO培養(yǎng)基
X-VIVO 10
X-VIVO 10 with Gentamicin and Phenol Red
X-VIVO 10 w/o Gentamicin and Phenol Red
簡介：為了有助于在無血清環(huán)境中制備淋巴因子激活的殺傷細(xì)胞(LAK)而設(shè)計的。
X-VIVO 15
X-VIVO 15 with Gentamicin and Phenol Red
X-VIVO 15 w/o Gentamicin or Phenol Red
簡介：在組成上和X-VIVO 10相似，并且經(jīng)過調(diào)整優(yōu)化使之適合于無血清條件下腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TIL）的增殖，其配方有助于外周學(xué)及人類腫瘤中分離純化的CD3+細(xì)胞的增殖。同時還用于維持人類單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及細(xì)胞系、粒細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞（NK）的生長。
X-VIVO 20
X-VIVO 20 with Gentamicin and Phenol Red, 1 L
簡介：經(jīng)過改進(jìn)和優(yōu)化有助于單核細(xì)胞耗竭的高密度的外周淋巴細(xì)胞制備LAK細(xì)胞。
存儲條件：2℃-8℃
三種培養(yǎng)的部分細(xì)胞類型應(yīng)用如下：
人和鼠淋巴因子激活殺傷細(xì)胞（LAK）；外周血淋巴細(xì)胞（PBL）；人和鼠腫瘤浸潤淋巴細(xì)胞（TIL）；人T細(xì)胞；人和鼠巨噬細(xì)胞；人和鼠造血干細(xì)胞（克隆形成和增殖）；人體組織的冰凍保存。
X-VIVO 產(chǎn)品的其他應(yīng)用包括：
PBL的增殖；TIL的增殖；器官的冰凍保存和移植；人單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的培養(yǎng)；干細(xì)胞的培養(yǎng)；樹突狀細(xì)胞的培養(yǎng)。
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