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MP的FastDNA? SPIN Kit for Soil中文說(shuō)明書

作者：admin 來(lái)源：本站發(fā)布時(shí)間： 2015-05-29 19:08　瀏覽次數(shù)：

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FastDNA® SPIN Kit for Soil (土壤基因組DNA提取試劑盒)

FastDNA SPIN Kit for Soil中文說(shuō)明書

FastDNA® SPIN Kit for Soil的目的是從土壤樣品中提取基因組DNA 供PCR使用在不到30分鐘內(nèi)。快速DNA提取方法排除使用有害的有機(jī)溶劑，如苯酚和氯仿。該工具包可在土壤社區(qū)從所有的細(xì)菌，真菌，植物和動(dòng)物的基因組DNA提取。

該試劑盒包括三個(gè)部分：

Lysing Matrix E tubes中含有的陶瓷和硅粒子，旨在有效地溶解所有不同來(lái)源的微生物，包括真細(xì)菌孢子和芽孢，革蘭氏陽(yáng)性菌，酵母菌，藻類，線蟲和真菌。

2。均質(zhì)化試劑

MT Buffer和Sodium Phosphate Buffer都經(jīng)過(guò)精心挑選和準(zhǔn)備，使完整的樣本同質(zhì)化和蛋白增溶。試劑能夠以最小的RNA污染提取基因組DNA。

3。 DNA純化和洗脫試劑

GENECLEAN ?過(guò)程是他們用來(lái)純化基因組DNA。程序純化DNA用專門的硅膠基質(zhì)的同時(shí)消除污染物，抑制并發(fā)反應(yīng)。

* Binding Matrix懸浮

* SEWS-M（鹽乙醇洗，用前加100ml乙醇）

* DES（DNA洗脫液超純水）

試驗(yàn)方案

樣品處理：

1。添加500毫克的土壤到Lysing Matrix E Tube。

由于FastPrep ?儀器的移動(dòng)，在管內(nèi)看到大量的聚集。相同Lysing Matrix不應(yīng)超過(guò)管的體積的7 / 8。留在管的空間，也提高了更好的同質(zhì)化的機(jī)會(huì)。 [見注1] 裂解：

加入978μl Sodium Phosphate Buffer 和122μl MT Buffer。 [見注1]

2。在FastPrep ?儀器中混勻40秒的速度6.0。

3。14000 XG離心Lysing Matrix E Tubes 5-10分鐘。[見注2]

4。上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)2ml干凈的管。加入250μlPPS試劑和混合，用手搖動(dòng)管的10次。

5。 14000 XG離心5分鐘沉淀沉淀。上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)干凈的15毫升管。上清液加入1ml Binding Matrix Suspension。（Binding Matrix在用前重懸均勻）

6。放在一個(gè)旋轉(zhuǎn)器或手工反轉(zhuǎn)2分鐘，讓DNA結(jié)合基質(zhì)。將管放架上靜置3分鐘，讓硅膠基質(zhì)沉淀。

7。小心去除500μL上清，避免碰到沉淀的Binding Matrix。棄上清。重懸Binding

TMMatrix在剩余的液體中。約600μl的混合物轉(zhuǎn)移到SPIN Filter，14000 XG離

心1分鐘。倒空Catch Tube，并把剩下的上清加到SPINTM Filter中離心過(guò)濾。

8。添加500μL SEWS-M 到SPINTM Filter，離心1分鐘，在14000 XG。倒出流過(guò)液并把SPINTM Filter放回Catch Tube。14000 XG離心2分鐘，在清干SPINTM Filter中的剩余SEWS-M

9。移動(dòng)SPINTM Filter到新的Catch Tube，室溫下風(fēng)干5分鐘。

10。加入50-100μL DES輕輕的重懸，輕輕攪動(dòng)濾膜用槍頭或渦流/手指輕彈，

重懸為高效的DNA洗脫二氧化硅矩陣。在14000 XG離心1分鐘，轉(zhuǎn)移洗脫的DNA到Catch Tube。 DNA是目前應(yīng)用就緒。

請(qǐng)閱讀在進(jìn)行任何FastPrep® DNA提取之前 1。注1

重要：留下約0.25cc的空氣空間。如果留下太少的空氣空間，可能導(dǎo)致樣品的損失，由于管故障或變形。樣品的損失是由溫升FastPrep ?運(yùn)行期間使壓力增加。在管內(nèi)預(yù)留0.25cc空氣空間，足夠防止在例行FastPrep ?運(yùn)行中樣品損失。 2。注2

擴(kuò)展到15分鐘的旋轉(zhuǎn)，可增強(qiáng)消除過(guò)多的碎片從大量的樣品或從復(fù)雜的細(xì)胞壁的細(xì)胞。

注意：請(qǐng)確認(rèn)管重量平衡和管的側(cè)面和底部不會(huì)刮檫到你的離心壁，因?yàn)檫@將導(dǎo)致樣品的快速流失的重量和平衡。

FastDNA® SPIN Kit for Soil (土壤基因組DNA提取試劑盒)

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